O nome completo dessa organização é, na verdade, Ansatsu Senjutsu Tokushu Butai (literalmente Esquadrão Especial de Assassinato e Tática), eles são os ninjas de elite que servem diretamente ao líder da vila – ou seja, a ANBU é subordinada apenas ao Hokage, e são responsáveis por cumprir as ordens de assassinato, proteção de seu líder e missões que não admitem falhas.

Os membros desse esquadrão usam um uniforme padrão (um colete branco e alguns protetores metálicos nos braços e pernas), cada um deles esconde o rosto por trás de uma máscara de porcelana que representa um animal do zodíaco japonês. A maioria tem uma ninja-to (espada usada por ninjas) presa nas costas, e costumam usar capas quando não estão lutando. Uma outra característica dos membros da ANBU de Konoha é uma tatuagem em forma de espiral no braço esquerdo.

Sabe-se que os ninjas desta equipe têm conhecimento detalhado da anatomia humana e desenvolveram inúmeras técnicas para aperfeiçoar seu trabalho (que é, geralmente, assassinato). Alguns personagens bastante conhecidos como Hatake Kakashi, Yamato e Uchiha Itachi fizeram parte da ANBU.

Ne (根) significa “raíz” - portanto, ANBU Ne é uma metáfora: se Konohagakure é uma árvore cheia de folhas (ninjas), a Ne é a raiz que sustenta essa árvore. O shinobi Danzou, contemporâneo do Sandaime Hokage, criou um braço da ANBU original que, ao invés de estar sob o controle do Hokage, é subordinada ao próprio Danzou. De acordo com ele, o objetivo seria seguir a risca a premissa de que um shinobi não deve demonstrar emoções, treinando e condicionando crianças nesse intento – e até mesmo chegando a utilizar o método de formação de Kirigakure no Sato, onde os aspirantes a ninja lutavam entre si até a morte.

Danzou treinou um garoto de nome desconhecido (que para essa missão ganhou o nome Sai) para que ele não tivesse sentimentos e estivesse pronto para a maior missão dele, a mais importante. Danzou colocou Sai no time Kakashi, junto com o jinchuuriki da Kyuubi, Uzumaki Naruto, na missão de pegar e levar para Konoha o espião que Sasori (da Akatsuki) colocou infiltrado no Orochimaru. Assim começou a missão de Sai, observando a luta de Uzumaki Naruto e Orochimaru. Quando ela acabou, Sai se aproximou de Orochimaru com uma mensagem. Assim que leu a mensagem, Orochimaru disse que Sai pode ir com ele. O objetivo de Danzou é a destruição de Konoha, sendo um de seus principais movimentos a aliança com Orochimaru.Tendo como verdadeira missão matar o Uchiha Sasuke que estava sendo treinado por Orochimaru. Sai mudou sua missão após um discurso de Naruto sobre amizade como tinha por Sasuke e sua intenção de trazê-lo de volta a Konoha. Então Sai passa a ajudar o Naruto a trazer Sasuke de volta a Konoha.